Bezobjawowa reaktywacja wirusa JC u pacjentów leczonych Natalizumabem ad

13,16 W tej ostatniej grupie, region regulatorowy wirusa JC zawiera rearanżacje sygnatur, w tym duplikacje, delecje i mutacje, które są również konsekwentnie spotykane w mózgu i płynie mózgowo-rdzeniowym pacjentów z PML, ale nie w moczu.17,18 Natalizumab wyzwala również uwalnianie niedojrzałych leukocytów ze szpiku kostnego. Postawiono hipotezę, że komórki te mogą być zakażone wirusem JC19 i, u niektórych pacjentów, mogą przenosić wirus do mózgu, prowadząc do PML.
Natalizumab nie wpływa na produkcję przeciwciał. Większość dorosłych jest seropozytywnych wobec wirusa JC i chociaż humoralna odpowiedź immunologiczna nie może zapobiec reaktywacji wirusa JC i rozwojowi PML, my i inni odkryliśmy, że komórkowa odpowiedź immunologiczna odgrywa kluczową rolę w powstrzymywaniu wirusa JC20-24 i pośredniczy w komórkach T cytotoksycznych CD8 +. Wirus BK, poliomawirus powiązany z wirusem JC, może ulec reaktywacji u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym leczonych natalizumabem. 25 BK jest czynnikiem etiologicznym nefropatii występującej u biorców przeszczepów nerek.
W tym badaniu staraliśmy się ustalić, czy reaktywacja wirusa JC i transformacja neurotropowa występują we krwi, moczu lub u obu pacjentów ze stwardnieniem rozsianym leczonych natalizumabem przez okres 18 miesięcy. Użyliśmy wirusa BK jako wirusa kontrolnego i skorelowaliśmy pomiary wirusologiczne z komórkowymi odpowiedziami immunologicznymi przeciwko wirusowi JC.
Metody
Wybór uczestników badań
Dziewiętnastu kolejnych pacjentów, którzy otrzymali diagnozę nawracającej postaci stwardnienia rozsianego w Klinice Stwardnienia Rozsianego w Beth Israel Deaconess Medical Center Wydział Neurologii wyraził pisemną świadomą zgodę na zapisanie się do tego badania przed rozpoczęciem przyjmowania natalizumabu w 2006 r. Grupa pacjentów składała się z: 15 kobiet i 4 mężczyzn, z medianą wieku 42 lat (zakres od 21 do 51). Mediana czasu trwania choroby od czasu rozpoznania wynosiła 5 lat (zakres od 8 miesięcy do 19 lat). Czternastu pacjentów otrzymywało interferon beta, a jeden otrzymywał octan glatirameru do co najmniej 4 tygodni (zakres od 4 tygodni do 2 lat) przed rozpoczęciem terapii natalizumabem jako comiesięczny wlew. Żaden z pacjentów nie był leczony kortykosteroidami przez średni okres 13 tygodni (zakres od 4 tygodni do 2 lat) przed przyjęciem natalizumabu. Próbki krwi i moczu pobierano przed rozpoczęciem leczenia natalizumabem, a następnie po 3, 6, 12 i 18 miesiącach, w czasie infuzji natalizumabu.
Wykrywanie wirusowego DNA za pomocą ilościowego testu PCR
Ilościowa reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) w czasie rzeczywistym była stosowana do pomiaru DNA DNA wirusa BK27 i wirusa JC27 w moczu, osoczu i jednojądrzastych komórek krwi obwodowej (PBMC), jak opisano wcześniej.26-28 Dolny limit wykrywania dla wirus zawierał 10 kopii na mikrogram DNA komórkowego w próbkach PBMC i 25 kopii na mililitr w próbkach osocza lub moczu.
Amplifikacja PCR, klonowanie i sekwencjonowanie regionu regulacyjnego wirusa JC
Region regulatorowy wirusa JC poddano amplifikacji PCR, jak opisano w literaturze.29 Produkty PCR następnie sklonowano z użyciem zestawu do klonowania plazmidu (wektor pCR 2.1-TOPO [Invitrogen]) i poddano sekwencjonowaniu w ABI 3730 DNA Analyzer (Applied Biosystems).
Testy
W celu wykrycia limfocytów T specyficznych dla białka VP1 wirusa JC, przeprowadziliśmy test immunologiczny interferonu gamma 30 (ELISpot Assay, R & D Systems), stosując hodowane PBMC od pacjentów, jak opisano w dodatkowym dodatku, dostępnym z pełnym tekstem tego artykułu pod adresem .
Przeprowadzono test immunoenzymatyczny w celu wykrycia przeciwciał IgG i IgM przeciwko wirusom JC i BK w próbkach krwi pacjentów, jak opisano wcześniej.31,32
Analiza statystyczna
Częstość występowania wirusa JC i wirusa BK wykryta w moczu, osoczu i PBMC w każdym punkcie czasowym (3, 6, 12 i 18 miesięcy) została porównana z użyciem dwustronnego testu Fishera
[więcej w: ceftriakson, nicorix, sonoline ]
[więcej w: urolog dziecięcy warszawa, jejunostomia, terapia bobath ]

Powiązane tematy z artykułem: jejunostomia terapia bobath urolog dziecięcy warszawa